黃曲霉毒素總量免疫親和柱是怎么操作的？操作時(shí)又要注意什么？

發(fā)布時(shí)間： 2022-09-08　　點(diǎn)擊次數(shù)： 4938次

　　黃曲霉毒素總量免疫親和柱測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原、抗體反應(yīng)，抗體連接在柱體內(nèi)，樣品中的黃曲霉毒素經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)缓缶徛耐ㄟ^(guò)黃曲霉免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)毒素與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒(méi)有被結(jié)合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)。用甲醇洗脫黃曲霉毒素，然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。

　　原理：

　　樣品經(jīng)提取液提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)缓笸ㄟ^(guò)鍵合有黃曲霉毒素總量免疫親和柱。此時(shí)，黃曲霉毒素被親和柱中的抗體特異性的吸附，用水或緩沖液將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去，然后用甲醇使抗體變性，從而將黃曲霉毒素從親和柱上洗脫下來(lái)。最后，用HPLC或熒光計(jì)進(jìn)行定量檢測(cè)。

　　黃曲霉毒素總量免疫親和柱的操作步驟簡(jiǎn)介：

　　1、提取樣品：研磨、稱(chēng)重50g樣品；用甲醇/水（80/20 V/V）混合物將樣品高速混勻1分鐘。

　　2、過(guò)濾：將提取的樣品濾膜過(guò)濾，然后再過(guò)0.4μm濾膜。

　　3、吸附、淋洗：將濾液2ml加到8ml PBS緩沖液（pH7.2）后，通過(guò)AflaCLEAN凈化柱，流速不大于1mL/min；用10ml水清洗親合柱；用甲醇1ml 兩次將黃曲霉毒素從親合柱上淋洗下來(lái)，并收集于HPLC進(jìn)樣小瓶中。

　　4、測(cè)定：HPLC直接進(jìn)樣，在經(jīng)過(guò)柱分離后，被UVE衍生化，被熒光檢測(cè)器記錄各種黃曲霉毒素的濃度。

　　注意事項(xiàng)：

　　1、黃曲霉毒素對(duì)人體有害，應(yīng)戴手套操作；

　　2、使用過(guò)的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液用5%濃度的NaClO溶液浸泡過(guò)夜；

　　3、不要使用過(guò)了有效日期的免疫親和柱；

　　4、免疫親和柱不使用時(shí)要2-8℃保存，不可凍存；

　　5、使用前，免疫親和柱需回至室溫（22-25℃）；

　　6、取樣量：根據(jù)實(shí)際情況可以適當(dāng)增減，但不可太少，同時(shí)提取液體積要按比例隨之改變；